Prevalence of Bartonella species in shelter cats and their ectoparasites in southeastern Brazil / Prevalência de espécies de Bartonella em gatos de abrigos e seus ectoparasitas no Sudeste do Brasil

Abstract Feline Bartonella can be transmitted to humans through cat scratches or bites, and between cats, by the flea Ctenocephalides felis. The study was carried out in order to investigate the occurrence of Bartonella DNA in cats living in shelters and their ectoparasites and the relationship between the infection status of cats and ectoparasites they host. Bartonella DNA was detected in 47.8% of the cat blood samples, 18.3% of C. felis fleas, 13.3% of flea egg pools and 12.5% of lice pools. B. henselae and B. clarridgeiae DNA were detected in cat fleas, while B. henselae, B. clarridgeiae and B. koehlerae were found in blood samples from bacteremic cats. Cats infested by positive ectoparasites showed approximately twice the odds of being infected. Our results indicate that shelter cats have high prevalence of Bartonella species that are known to be human pathogens. This highlights the importance of controlling infestations by ectoparasites to avoid cat and human infection.

Resumo Algumas espécies de Bartonella têm os felinos como principais hospedeiros reservatórios. Tais patógenos são transmitidos ao homem por intermédio da arranhadura ou mordedura de gatos e entre os gatos, por meio da pulga Ctenocephalides felis. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de DNA de Bartonella spp. em gatos de abrigos e seus ectoparasitas e a relação entre o estado de infecção dos gatos e dos ectoparasitas albergados por estes. Material genético bacteriano foi detectado em 47,8% das amostras de sangue de gatos, 18,3% das pulgas C. felis, 13,3% dos "pools" de ovos de pulgas e 12,5% dos "pools" de piolhos. DNA de B. henselae e B. clarridgeiae foi detectado em pulgas, e B. henselae, B. clarridgeiae e B. koehlerae, em amostras de sangue de gatos. Gatos infestados por ectoparasitas que carreavam DNA de Bartonella spp. demonstraram aproximadamente o dobro de chance de estarem infectados. Esses resultados indicam que os gatos de abrigos têm alta prevalência de infecção por espécies de Bartonella, capazes de causar doenças no homem. E também destacam a importância do controle e prevenção da infestação por ectoparasitas, no intuito de prevenir a infecção em gatos e humanos.

Detection of a putative novel genotype of Ehrlichia sp. from opossums (Didelphis aurita) from Brazil / Detecção de um suposto novo genótipo de Ehrlichia sp. em gambás (Didelphis aurita) do Brasil

Abstract Erlichiosis affects humans and animals worldwide. Its distribution and prevalence depends on the presence of tick vectors and hosts in one geographic area. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. in opossums (Didelphis sp.) from the State of Rio de Janeiro, southeast Brazil. Blood samples from 37 animals were tested for these two pathogens using molecular methods. One animal (2.7%) was positive for Ehrlichia sp. by 16S rRNA-based nested PCR. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, we detected a novel Ehrlichia sp. genotype closely related to genotypes of E. canis previously reported in dogs from Brazil. To the authors' knowledge, this is the first molecular detection of Ehrlichia sp. in opossums from this State in the southeastern region of the country.

Resumo A erliquiose afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Sua distribuição e prevalência dependem da presença de vetores de carrapatos e hospedeiros em uma área geográfica. O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em gambás (Didelphis sp.) do Estado do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil. Amostras de sangue de 37 animais foram testadas para estes dois patógenos usando métodos moleculares. Um animal (2,7%) foi positivo para Ehrlichia sp. baseado em 16S rRNA-nested PCR. Em uma análise filogenética baseada no gene 16S rRNA usando o método de máxima verossimilhança e o modelo evolutivo GTRGAMMA + I, detectamos um novo genótipo de Ehrlichia sp. intimamente relacionado a genótipos de E. canis previamente relatados em cães do Brasil. Para o conhecimento dos autores, esta é a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em gambás deste estado na região sudeste do país.

Ehrlichia spp. infection in domestic cats from Rio de Janeiro State, southeast Brazil / Infecção de Ehrlichia spp. em gatos domésticos da Grande Rio de Janeiro, sudeste do Brasil

Abstract Ehrlichiosis is caused by agents belonging to Ehrlichia genus. Despite the frequent reports on the serological and molecular detection of E. canis in dogs in Brazil, there is scant data on ehrlichiosis in brazilian cats. This study aimed at investigating the occurrence of Ehrlichia spp. in domestic cats from Greater Rio de Janeiro, and evaluating hematological changes associated with this rickettsial infection. We searched for IgG antibodies against E. canis on blood samples of 216 cats by Indirect Fluorescence Assay (IFA). Additionally, we performed nested PCR (nPCR) and real-time PCR (qPCR) assays targeting E. canis-16S rRNA and dsb gene, respectively. Fifty-seven (26.4%) cats were seropositive for Ehrlichia spp. by IFA. Ehrlichia spp.-16S rRNA gene fragments were detected in 3 cats (1.4%). Although the obtained 16S rRNA sequences showed 99 to 100% identity with E. canis, cats were negative in qPCR. Anemia, thrombocytopenia, leukocytosis, left shift neutrophil and hyperproteinemia were observed. Anemia was statistically associated with seropositivity to E. canis and kittens showed lower positivity rates (p<0.05). This study showed that Ehrlichia spp. occur in domestic cats from Greater Rio de Janeiro. Further studies involving culture isolation are much needed to more precisely characterize these organisms.

Resumo A erliquiose é causada por agentes pertencentes ao gênero Ehrlichia . Apesar dos frequentes relatos de detecção sorológica e molecular de E. canis em cães no Brasil, existem poucos dados sobre a erliquiose em gatos brasileiros. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Ehrlichia spp. em gatos domésticos do Grande Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas associadas a essa infecção rickettsial. Procuramos anticorpos IgG anti-E. canis em amostras de sangue de 216 gatos por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Além disso, foram realizados ensaios de nested PCR (nPCR) e PCR em tempo real (qPCR) para detecção dos genes E. canis-16S rRNA e dsb , respectivamente. Cinquenta e sete (26,4%) gatos foram soropositivos para Ehrlichia spp. pela RIFI. Fragmentos do gene rRNA de Ehrlichia spp.-16S foram detectados em 3 gatos (1,4%) por ensaios de nPCR. Embora as sequências 16S rRNA obtidas tenham 99 a 100% de identidade com E. canis, os gatos foram negativos nos ensaios de qPCR. Anemia, trombocitopenia, leucocitose, desvio nuclear neutrofílico à esquerda e hiperproteinemia foram observados. Anemia foi estatisticamente associada à soropositividade para E. canis e filhotes apresentaram menores taxas de positividade (p <0,05). Este estudo demonstra que Ehrlichia spp. ocorrem em gatos domésticos da Grande Rio de Janeiro. Outros estudos envolvendo o isolamento por cultura são necessários para caracterizar com mais precisão esses organismos.

Detection of a putative novel genotype of Ehrlichia sp. from opossums (Didelphis aurita) from Brazil

Abstract Erlichiosis affects humans and animals worldwide. Its distribution and prevalence depends on the presence of tick vectors and hosts in one geographic area. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. in opossums (Didelphis sp.) from the State of Rio de Janeiro, southeast Brazil. Blood samples from 37 animals were tested for these two pathogens using molecular methods. One animal (2.7%) was positive for Ehrlichia sp. by 16S rRNA-based nested PCR. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, we detected a novel Ehrlichia sp. genotype closely related to genotypes of E. canis previously reported in dogs from Brazil. To the authors knowledge, this is the first molecular detection of Ehrlichia sp. in opossums from this State in the southeastern region of the country.

Resumo A erliquiose afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Sua distribuição e prevalência dependem da presença de vetores de carrapatos e hospedeiros em uma área geográfica. O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em gambás (Didelphis sp.) do Estado do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil. Amostras de sangue de 37 animais foram testadas para estes dois patógenos usando métodos moleculares. Um animal (2,7%) foi positivo para Ehrlichia sp. baseado em 16S rRNA-nested PCR. Em uma análise filogenética baseada no gene 16S rRNA usando o método de máxima verossimilhança e o modelo evolutivo GTRGAMMA + I, detectamos um novo genótipo de Ehrlichia sp. intimamente relacionado a genótipos de E. canis previamente relatados em cães do Brasil. Para o conhecimento dos autores, esta é a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em gambás deste estado na região sudeste do país.

Hematological changes associated with hemoplasma infection in cats in Rio de Janeiro, Brazil / Alterações hematológicas associadas à infecção por hemoplasmas em gatos do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract This study aimed to detect Mycoplasma spp. in naturally infected cats from Rio de Janeiro and to evaluate hematological abnormalities and factors associated with this infection. Out of the 197 cats sampled, 11.2% presented structures compatible with hemoplasma organisms on blood smears. In contrast, 22.8% were positive for Mycoplasma spp. by means of 16S rRNA gene real-time polymerase chain reaction, which reflects the weak concordance between techniques. The infection rates, by means of 16S rRNA gene conventional polymerase chain reaction, was 4.6%, 4.6% and 11.7% for Mycoplasma haemofelis (Mhf), ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ (CMt) and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm), respectively. Mhf and CMhm infections are more frequent in the summer (p>0.05). Presence of anemia (p < 0.02), lymphocytosis (p < 0.03), thrombocytopenia (p < 0.04) and activated monocytes (p < 0.04) was associated with Mhf infection. No hematological abnormality was associated with CMt or CMhm infection. Male cats were more prone to be infected by Mhf or CMhm (p < 0.01). Adult cats had more chance to be infected by CMhm. Three hemoplasma species occur in the metropolitan region of Rio de Janeiro and Mhf seems to be the most pathogenic of them. Anemia is the most important hematological abnormality.

Resumo Este estudo teve por objetivo detectar Mycoplasma spp. em gatos naturalmente infectados do Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas e fatores associados à infecção. Dos 197 gatos amostrados, 11,2% apresentaram estruturas compatíveis com hemoplasmas em esfregaços de sangue. Em contraste, 22,8% foram positivas para Mycoplasma spp. por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), baseado no gene 16S rRNA, o que reflete a fraca concordância entre as técnicas. As taxas de infecção, por meio da reação em cadeia da polimerase convencional baseada no gene 16S rRNA, foi de 4,6%, 4,6% e 11,7% para Mycoplasma haemofelis (Mhf), 'Candidatus Mycoplasma turicensis' (CMt) e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' (CMhm), respectivamente. Infecção por Mhf e CMhm foram mais frequentes no verão (p> 0,05). Anemia (p<0,02), linfocitose (p<0,03), trombocitopenia (p<0,04), e presença de monócitos ativados (p<0,04) foram associados à infecção por Mhf. Nenhuma alteração hematológica foi associada à infecção por CMt ou CMhm. Gatos machos estão mais propensos à infecção por Mhf ou CMhm (p<0,01). Gatos adultos têm maiores chances de se infectarem por CMhm. Há ocorrência de três espécies de hemoplasmas na Região Metropolitana do Rio de Janeiro e Mhf parece ser o mais patogênico, tendo a anemia como principal alteração hematológica.

Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from the state of Tocantins: serology and associated factors / Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães provenientes de Tocantins: sorologia e fatores associados

Abstract This study investigated occurrences of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFAT), along with risk factors associated with toxoplasmosis and neosporosis, in 204 dogs from urban and rural areas of the municipality of Araguaína, state of Tocantins, Brazil. One hundred and thirty samples (63.7%) were positive for T. gondii using ELISA: 57.1% and 70.7% in the urban and rural areas, respectively. The seropositivity frequency for T. gondii observed through IFAT was 57.4%, distributed between rural and urban areas as 62.6% and 52.4%, respectively. The factors associated with canine toxoplasmosis were age and breed (p<0.05). In relation to N. caninum, 88 samples (43.1%) were positive, according to ELISA, distributed as 42.9% in urban areas and 43.3% in rural areas. Anti - N. caninum antibodies were detected through IFAT in 62 dogs (30.4%), distributed as 31.3% and 29.5% between rural and urban areas, respectively. Age and breed were associated with neosporosis occurrence (p<0.05) by IFAT. This study provides the first detection of IgG antibodies for canine toxoplasmosis and neosporosis in the state of Tocantins and highlights the importance of dogs in the epidemiological chain of these diseases.

Resumo Este estudo investigou a ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), assim como os fatores de risco associados à toxoplasmose e à neosporose em 204 cães provenientes de áreas urbana e rural do município de Araguaína, Estado de Tocantins, Brasil. Cento e trinta amostras (63,7%) foram positivas para T. gondii, destas 57,1% e 70,7% oriundas de áreas urbanas e rurais, respectivamente. Considerando-se o teste RIFI, a frequência de soropositividade para T. gondii foi de 57,4% com distribuição de 62,6% e 52,4% entre áreas rurais e urbanas, respectivamente. Fatores associados à toxoplasmose canina foram raça e idade, com soropositividade maior para animais mais velhos (p<0,05). Em relação à N. caninum, 88 (43,1%) amostras foram positivas, segundo ELISA, sendo distribuídas em 42,9% para área urbana e 43,3% para área rural. Por meio da RIFI, anticorpos anti-N. caninum foram detectados em 62 (30,4%) cães, sendo distribuídos em 31,3% e 29,5% entre áreas rurais e urbanas, respectivamente. Os fatores associados à ocorrência de neosporose, pela RIFI, foram idade e raça (p<0,05). Este estudo representa a primeira detecção de anticorpos IgG para toxoplasmose e neosporose canina no Estado de Tocantins e evidencia a importância de cães na cadeia epidemiológica dessas doenças.

Seroprevalence rates of antibodies against Theileria equi in team roping horses from central-western region of Paraná / Soroprevalência de anticorpos contra Theileria equi em equinos atletas da região centro-oeste do Paraná

The purpose of this study was to estimate the prevalence of Theileria equi in horses from central western region of Paraná state, Brazil. The presence of antibodies IgG against T. equi was determined in serum samples obtained from 400 team roping horses of the district of Guarapuava by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results showed that 242 (61%) animals were positive which demonstrates that equine piroplasmosis is widespread and therefore it might be a contributing factor for the irregular performance among athletes horses in the region studied. No association regarding age and sex were observed (p>0.05). To our knowledge, this is the first report describing a serological survey on equine piroplasmosis in the state of Paraná, Brazil.

O objetivo deste estudo foi estimar a prevalência de Theileria equi em equinos da região centro-oeste do Estado do Paraná, Brasil. A presença de anticorpos IgG contra T. equi foi determinada em amostras de soro obtidas a partir de 400 cavalos atletas do distrito de Guarapuava pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram que 242 (61%) animais foram positivos, o que demonstra que a piroplasmose equina apresenta ampla distribuição e, portanto, poderá contribuir para a performace irregular de cavalos que participam de eventos desportivos na região. Não foi observada associação com a idade ou sexo dos equinos (p>0,05). Pelo que se sabe, este é o primeiro relato de levantamento sorológico sobre piroplasmose equina no Estado do Paraná, Brasil.

Perfil bioquímico e capacidade antioxidante total em cavalos de polo suplementados com selênio e vitamina-E / Biochemical profile and total antioxidant capacity in polo horses supplemented with selenium and vitamin-E

O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações bioquímicas e da capacidade antioxidante total (CAT) em cavalos de pólo, e o efeito da suplementação de selênio (Se) e vitamina E (Vit-E) sobre esses parâmetros. Dezesseis equinos aleatoriamente divididos em dois grupos, GE/Se (suplementados com Vit-E e Se) e GC (grupo controle), participaram de um jogo de polo com quatro períodos (chukkas) de 7 minutos. Cada cavalo competiu em dois chukkas, com 7minutos de intervalo. Amostras de sangue foram colhidas 15min antes do jogo (basal), ao final do 1° e 2° chukkas e 24h, 48h e 72h após o término da competição. Foram analisadas as atividades séricas da aspartato aminotrasferase (AST) , creatinoquinase (CK) e lactato desidrogenase (LDH), a glicemia e lactatemia e a capacidade antioxidante total (CAT). Os valores de aspartato aminotrasferase, creatinoquinase e lactato desidrogenase não apresentaram diferenças significativas entre o GE/Se e o GC. A atividade de AST e LDH aumentou significativamente em relação ao valor basal (P=0,097) e (P=0,0002), respectivamente, e permaneceram elevadas por mais tempo no GC. A CK não apresentou variações significativas em relação ao basal em ambos os grupos. A lactatemia aumentou significativamente após cada chukka, comparada ao basal e foi maior no GC que no GE/Se após o primeiro chukka (P<0,05). A CAT foi significativamente menor (P=2,90-25) após o primeiro chukka, retornando aos valores basais após 24 horas, porém sem diferença entre os grupos. Conclui-se que a suplementação com vit-E e Se não influencia nos parâmetros avaliados. O exercício alterou o perfil bioquímico e a CAT sem causar lesões, sugerindo um bom condicionamento físico e adequada proteção antioxidante nos animais estudados.

The aim of this study was to evaluate the biochemical and the total antioxidant capacity (TAC) on polo horses, and the effect of selenium (Se) and vitamin E (vit-E) on these parameters. Sixteen horses were randomly divided into two groups, GE/Se (supplemented with vit-E and Se) and GC (control group) participated in a game of polo with four periods (chukkas) of 7min. Each horse has competed in two chukkas, with an interval of 7 min. Blood samples were collected 15min. before the game (baseline), at the end of the 1st and 2nd chukkas and 24h, 48h and 72h after the competition. Were analyzed the serum activity of aspartate aminotrasferase (AST), creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH), blood glucose and blood lactate concentration and total antioxidant capacity (TAC). There was no significant difference between GE/Se and GC to AST, CK and LDH. The activity of AST and LDH increased significantly compared to the baseline value, (P=0.097) and (P=0.0002), respectively, and remain elevated for more time in GC. CK didn't change significantly in relation to baseline in both groups. The blood lactate was significantly higger after each chukka than in baseline, but don't heve significant difference between GE/Se and CG. The CAT decreased significantly (P=2.90-25) after the first chukka, returning to baseline in 24 hours, but there was no difference between groups. It is concluded that supplementation with vit-E and Se had no influence on the parameters evaluated. The exercise changed the biochemical profile and the TAC without causing injuries, suggesting a good conditioning and adequate antioxidant protection.

Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in goats and sheep in western Maranhão, Brazil / Ocorrência de anticorpos IgG anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em caprinos e ovinos do oeste do Maranhão, Brasil

Neosporosis and toxoplasmosis are parasitic diseases which can cause reproductive problems in goats and sheep. The current study aimed to determine the occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in goats and sheep from the districts of Amarante do Maranhão and Buritirana, Imperatriz microregion, western area of Maranhão State, northeastern Brazil, and to assess factors associated to infection by these etiologic agents. Blood samples from 110 animals (46 goats and 64 sheep) from five herds were collected, and indirect immunofluorescence assay was used for serological testing. Of 46 goat samples, 17.39 percent (n = 8) showed anti-N. caninum antibodies and 4.35 percent (n = 2) anti-T. gondii, while of 64 sheep samples 4.69 percent (n = 3) and 18.75 percent (n = 12) showed anti-N. caninum and anti-T. gondii antibodies, respectively. No significant difference regarding the presence of domestic cats and/or dogs on the property and veterinary care was seen for both etiologic agents studied. However, food supplementation and animal reproductive failure were significantly (p < 0.05) for N. caninum among sheep and goats, respectively. The current study showed that goats and sheep in western Maranhão are exposed to N. caninum and T. gondii. It is the first evidence of these agents in small ruminants in this region.

A neosporose e a toxoplasmose são doenças parasitárias que podem causar problemas reprodutivos em caprinos e ovinos. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de anticorpos IgG anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em caprinos e ovinos dos municípios de Amarante do Maranhão e Buritirana, microrregião de Imperatriz, Oeste maranhense, Nordeste do Brasil, bem como avaliar fatores associados à infecção por esses agentes etiológicos. Amostras de sangue de 110 animais (46 caprinos e 64 ovinos), provenientes de cinco propriedades, foram coletadas, e a reação de imunofluorescência indireta utilizada para o diagnóstico sorológico. Das 46 amostras de caprinos, 17,39 por cento (n = 8) apresentaram anticorpos anti-N. caninum e 4,35 por cento (n = 2) anti-T. gondii, enquanto das 64 amostras de ovinos, 4,69 por cento (n = 3) e 18,75 por cento (n = 12) apresentaram anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii, respectivamente. Não houve diferença significativa, considerando-se a presença de gato e/ou cão na propriedade e assistência veterinária para ambos os agentes estudados. Entretanto, suplementação alimentar e presença de animais com problemas reprodutivos diferiram significativamente (p < 0,05) em ovinos e caprinos, respectivamente. Os resultados do presente estudo demonstraram que caprinos e ovinos, da região Oeste do Maranhão são expostos aos coccídios N. caninum e T. gondii. Essa é a primeira evidência desses agentes em pequenos ruminantes nessa região.

Seroprevalence of IgG antibodies against Anaplasma marginale in cattle from south Mozambique / Soroprevalência de anticorpos de classe IgG contra Anaplasma marginale em bovinos da região Sul de Moçambique

The current study aimed to investigate the seroprevalence of IgG antibodies to Anaplasma marginale in cattle from Maputo, Gaza and Inhambane provinces, south Mozambique. A total of 809 serum samples from cattle were obtained and tested by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (i-ELISA). The chi-square test at 5 percent significance was used to assess the association between seroprevalence and the variables gender, age and geographic origin of animals. The overall seropositivity was 76.5 percent (n = 619) and anti-A. marginale antibodies were detected in 89.1 percent (n = 156), 68.4 percent (n = 308) and 84.2 percent (n = 155) of the animals in the provinces of Maputo, Gaza and Inhambane, respectively. A significant association (p < 0.05) was found with the geographic origin of the animals, while sex had no significant relationship. The frequencies of seropositive in the age groups were 63.2 percent (n = 72), 80.0 percent (n = 92), 83.1 percent (n = 98) and 77.3 percent (n = 357) for animals <12; >12 and <24; >24 and <36; >36 months, respectively. These results indicate that in southern Mozambique there are areas of enzootic stability to A. marginale. Thus, epidemiological monitoring is required to monitor the immune status of animals in the region.

O objetivo do presente estudo foi investigar a soroprevalência de anticorpos da classe IgG contra Anaplasma marginale em bovinos de corte da região Sul de Moçambique. Para esse efeito, 809 amostras de soro foram coletadas e avaliadas pelo ensaio imunoadsorção enzimático indireto (ELISA-i). O teste Qui-Quadrado, a 5 por cento de significância, foi utilizado para avaliar a associação entre a soroprevalência e as variáveis sexo, idade e origem geográfica dos animais. A soropositividade geral foi de 76,5 por cento (n = 619), e anticorpos anti-A. marginale foram detectados em 89,1 por cento (n = 156), 68,4 por cento (n = 308) e 84,2 por cento (n = 155) dos animais nas províncias de Maputo, Gaza e Inhambane, respectivamente. Uma associação significativa (p < 0,05) foi observada entre a origem geográfica dos animais, enquanto o sexo não demonstrou uma relação significativa. A frequência de soropositivos com relação à faixa etária foi de 63,2 por cento (n = 72), 80,0 por cento (n = 92), 83,1 por cento (n = 98) e 77,3 por cento (n = 357) para animais de <12; >12 a <24; >24 <36; >36 meses, respectivamente. Os resultados demonstram que, no Sul de Moçambique, existem áreas de estabilidade enzoótica para A. marginale, em animais maiores de 12 meses. Assim, monitoramento epidemiológico deve ser realizado para o acompanhamento do status imunológico dos animais na região.

Factors associated to Theileria equi in equids of two microregions from Rio de Janeiro, Brazil / Fatores associados à Theileria equi em equídeos de duas microrregiões do Rio de Janeiro, Brasil

Serum samples from 714 equids of Itaguaí and Serrana microregions, Rio de Janeiro, southeastern Brazil, were examined by indirect fluorescent antibody test (titer 1:80) for Theileria equi. The prevalence in the microregions and factors associated with seropositivity were evaluated and the prevalence ratio (PR) calculated. The overall prevalence of T. equi infection was 81.09 percent (n = 579), with higher prevalence (p < 0.05) in the Itaguaí (85.43 percent) when compared to Serrana microregion (76.92 percent). The geographic area, altitude, farming condition and area of origin of equids were associated (p < 0.05) with seropositivity for T. equi. Equids reared in the Itaguaí microregion (PR = 1.11, p = 0.003) and at altitudes below 500 m (PR = 1.10; p = 0,014) were more likely to be seropositive for T. equi. Furthermore, when equids were born in the farm (PR = 1.10, p = 0.008) and reared with poor farming conditions (PR = 1.13, p = 0.018) they were more likely to be exposed to T. equi. The main ticks found on equids were Amblyomma cajennense and Dermacentor (Anocentor) nitens. The microregions studied are endemic areas for equine theileriosis and there exists enzootic stability for T. equi. Only factors related to the collection area of serum samples influenced the seropositivity of equids for T. equi in that region.

Amostras de soro de 714 equídeos das microrregiões de Itaguaí e Serrana, Rio de Janeiro, Brasil, foram submetidas ao teste de imunofluorescência indireta (título 1:80) para Theileria equi. A prevalência entre as microrregiões e os fatores associados à soropositividade foram avaliados e a razão de prevalência (RP) calculada. A prevalência geral para T. equi foi de 81,09 por cento (n = 579), com maior prevalência (p < 0,05) para microrregião de Itaguaí (85,43 por cento), quando comparado a Serrana (76,92 por cento). A região, altitude, nível da propriedade e origem dos equídeos foram associados (p < 0,05) com a soropositividade para T. equi. Equídeos criados na microrregião de Itaguaí (RP = 1,11; p = 0,003) e em altitudes abaixo de 500 m (RP = 1.10; p = 0,014) apresentaram maior chance de se tornarem soropositivos para T. equi. Além disso, quando são criados em propriedades de nível ruim (RP = 1,13; p = 0,018) e nascidos na propriedade (RP = 1,10; p = 0,008) apresentaram mais chance de terem contato com T. equi. As principais espécies de carrapatos encontradas parasitando os equídeos foram Amblyomma cajennense e Dermacentor (Anocentor) nitens. As microrregiões estudadas são endêmicas para theileriose equina e de estabilidade enzoótica para T. equi. Apenas os fatores relacionados à área de coleta das amostras de soro influenciaram a soropositividade dos equídeos para T. equi naquela região.

A novel A2 allele found in Leishmania (Leishmania) infantum chagasi / Novo alelo do gene A2 descrito em Leishmania (Leishmania) infantum chagasi

Visceral leishmaniasis (VL) is a widely spread zoonotic disease. In Brazil the disease is caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Peridomestic sandflies acquire the etiological agent by feeding on blood of infected reservoir animals, such as dogs or wildlife. The disease is endemic in Brazil and epidemic foci have been reported in densely populated cities all over the country. Many clinical features of Leishmania infection are related to the host-parasite relationship, and many candidate virulence factors in parasites that cause VL have been studied such as A2 genes. The A2 gene was first isolated in 1994 and then in 2005 three new alleles were described in Leishmania (Leishmania) infantum. In the present study we amplified by polymerase chain reaction (PCR) and sequenced the A2 gene from the genome of a clonal population of L. (L.) infantum chagasi VL parasites. The L. (L.) infantum chagasi A2 gene was amplified, cloned, and sequenced in. The amplified fragment showed approximately 90 percent similarity with another A2 allele amplified in Leishmania (Leishmania) donovani and in L.(L.) infantum described in literature. However, nucleotide translation shows differences in protein amino acid sequence, which may be essential to determine the variability of A2 genes in the species of the L. (L.) donovani complex and represents an additional tool to help understanding the role this gene family may have in establishing virulence and immunity in visceral leishmaniasis. This knowledge is important for the development of more accurate diagnostic tests and effective tools for disease control.

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose amplamente disseminada, causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Flebotomíneos vetores adquirem o agente etiológico, alimentando-se do sangue de animais contaminados, como cachorros ou animais selvagens. A doença é endêmica no Brasil, e focos de epidemia são relatados em cidades densamente povoadas por todo o país. Muitas manifestações clínicas relacionadas à infecção por Leishmania estão ligadas à relação parasito-hospedeiro, e vários possíveis fatores de virulência dos parasitas, que causam a LV, são alvos de estudo, tais como os genes A2. O gene A2 foi isolado pela primeira vez em 1994 e, em seguida, em 2005, três novos alelos foram descritos em Leishmania (Leishmania) infantum. No presente estudo, um fragmento do gene A2 de uma população clonal de L.(L.) infantum chagasi foi amplificado por PCR e sua sequência de nucleotídeos determinada. O fragmento mostrou 90 por cento de similaridade com alelos do gene A2 de Leishmania (Leishmania) donovani e de L. (L.) infantum, descritos na literatura. Entretanto, a tradução da sequência de nucleotídeos mostra diferenças na sequência de aminoácidos da proteína, que podem ser essenciais em determinar a variabilidade do gene A2 em espécies do complexo L. (L.) donovani e representa uma ferramenta adicional na compreenssão do papel dessa família de genes na virulência e imunidade da leishmaniose visceral. O conhecimento dessa variação é importante para o desenvolvimento de testes diagnósticos mais precisos e ferramentas mais eficazes no controle da doença.

Production of recombinant EMA-1 protein and its application for the diagnosis of Theileria equi using an enzyme immuno assay in horses from São Paulo State, Brazil / Produção da proteína recombinante EMA-1 e sua aplicação para o diagnóstico baseadono imuno ensaio enzimático de Theileria equi em equinos do Estado de São Paulo, Brasil

The erythrocytic-stage surface protein, Equi Merozoite Antigen 1 (EMA-1), is a major candidate for the development of a diagnostic antigen for equine piroplasmosis. In order to establish an effective diagnostic method for practical use, the gene encoding the entire EMA-1 of Theileria equi Jaboticabal strain was cloned and expressed in Escherichia coli as a histidine-tagged protein (His6-EMA1). The expressed EMA-1 reacted with specific antibodies in Western blot and had an apparent molecular mass of 34 kDa which was largely consistent with its theoretical value. The nucleotide sequence of the EMA-1 gene of Jaboticabal strain was comparatively analyzed with other published sequences. The results indicated a high degree of homology with EMA-1 genes of all other strains isolated from various countries. The recombinant purified His6-EMA1 protein was tested in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies anti-T. equi in horses. The ELISA clearly differentiated T. equi-infected from Babesia caballi-infected horse sera or normal horse sera. Field serum samples collected from horses in the State of São Paulo, Southeastern Brazil, were examined for the diagnosis of T. equi infection by ELISA. Of 170 samples analyzed, 95.88 percent (163/170) were positive for T. equi infection. These results suggest that the His6-EMA1 protein expressed in E. coli could be a reliable immunodiagnostic antigen for ELISA test and that T. equi infection is a serious concern in the State of São Paulo, Brazil.

A proteína de superfície eritrocitária, Antígeno 1 do Merozoíta de Theileria equi (EMA-1), é um potencial candidato para o desenvolvimento de antígenos de valor diagnóstico para a piroplasmose equina. Com o objetivo de estabelecer um método de diagnóstico efetivo e prático, o gene EMA-1 da amostra Jaboticabal - SP de T. equi foi clonado e expresso em Escherichia coli contendo uma cauda de poli-histidina (His6-EMA1). O EMA-1 expresso reagiu com anticorpos específicos no Western blot e apresentou peso molecular aparente de 34 kDa, sendo altamente consistente com seu valor teórico. A sequência nucleotídica do gene EMA-1 da amostra Jaboticabal foi analisado comparativamente com outras sequências públicas, e os resultados indicam elevado grau de homologia com amostras de diversos países. A proteína recombinante purificada His6-EMA1 foi testada no ensaio imunoenzimático (ELISA) para a detecção de anticorpos anti-T. equi em equinos. O teste de ELISA diferenciou-se claramente entre soros de equinos infectados por T. equi, soros de animais infectados por Babesia caballi e soro normal de equino. Amostras de soros coletadas de equinos do Estado de São Paulo, sudeste do Brasil, foram examinadas para o diagnóstico da infecção por T. equi pelo ELISA. Das 170 amostras analisadas, 95,88 por cento (163/170) foram positivas para T. equi. Os resultados sugerem que a proteína His6-EMA1 expressa em E. coli pode ser um antígeno confiável para diagnóstico imunológico pelo teste de ELISA, e que T. equi merece grande atenção no Estado de São Paulo.

Ciclo biológico de Argas miniatus em laboratório: estágio adulto / Life cycle of Argas (Persicargas) miniatus in the laboratory: adult stage

Os parâmetros do ciclo biológico de Argas (Persicargas) miniatus, fase adulta, foram estudados em condições controladas (27±1°C e 80±10 por cento UR) e em condições ambientais não controladas (ambiente de laboratório nas estações chuvosa e seca). Nessas condições, os machos se originaram preferencialmente de N2 e as fêmeas de N3. As fêmeas realizaram até 18 posturas (em condições controladas), enquanto que as fêmeas mantidas nas estações chuvosa e seca realizaram até 9 e 12 posturas, respectivamente. O número total de ovos foi 1350 (em condições controladas), 443 ovos na estação chuvosa e 894 ovos na estação seca. Em jejum, os carrapatos machos sobreviveram por 165 dias (condições controladas) e 135 dias em ambiente de laboratório; as fêmeas sobreviveram por 300 dias em condições controladas e 240 dias no ambiente de laboratório. Nas condições ambientais não controladas, os parâmetros biológicos do estágio adulto de Argas (Persicargas) miniatus sofreram alterações negativas, principalmente durante a estação chuvosa.

The life cycle of Argas (Persicargas) miniatus in adult stage was studied in controlled conditions (27±1°C and 80±10 percent RH) and uncontrolled temperature and humidity conditions (room conditions during wet and dry season). Males originated preferentially from N2 and females from N3. Females in controlled conditions laid eggs up to 18 times, while females in uncontrolled room conditions, during wet and dry seasons, laid eggs 9 to 12 times, respectively. In controlled conditions, females laid 1350 eggs, whereas in uncontrolled conditions females laid 443 eggs during the wet season and 894 eggs during the dry season. Male ticks survived without feeding for 165 days in controlled conditions and 135 days in uncontrolled conditions, while females survived for 300 days in controlled conditions and 240 days in uncontrolled conditions. In ambient conditions, biological parameters of Argas (Persicargas) miniatus adult stage were negatively affected especially during the wet season when compared with adult stage kept in controlled condition.

Occurrence of Theileria equi in horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil / Ocorrência de Theileria equi em equinos criados na microrregião de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil

Blood and serum samples from 170 horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil, were collected and tested by microscopic examination of blood smears, indirect fluorescent antibody test (IFAT) and nested polymerase chain reaction (nPCR) for Theileria equi infections. The association among the test results was verified by the McNemar test. During the examination of thin blood smears, parasites were detected in six (3.52 percent) horses. Anti-T. equi antibodies were detected in 100 percent sera samples, with titers ranging between 1:80 and 1:5120. The nPCR based on the T. equi merozoite antigen gene (EMA-1) allowed the visualization of specie-specific amplified product in 108 (63.53 percent) horses. All six samples judged positive microscopically were also positive for nPCR. Statistical analysis indicated general disagreement (p < 0.0001) between IFAT and nPCR; IFAT and blood smear; and nPCR and blood smear on the detection of parasite carriers. The results of the present study indicate that T. equi is widely spread among horses in the Jaboticabal microregion, Northeast region of São Paulo State, Brazil.

Amostras de sangue e soro de 170 equinos criados na microrregião de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil, foram coletadas e avaliadas pelo exame direto em esfregaço sanguíneo, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e nested reação em cadeia da polimerase (nPCR) para a detecção de infecções por Theileria equi. A concordância dos resultados entre os testes de diagnóstico foi verificada pelo teste de McNemar. Durante o exame dos esfregaços sanguíneos, parasitos foram detectados em seis (3,52 por cento) equinos. Anticorpos anti-T. equi foram detectados em 100 por cento das amostras de soros, com títulos variando entre 1:80 e 1:5120. O nPCR, baseado na sequência do gene do antígeno de merozoíto de T. equi (EMA-1), permitiu a visualização de produtos de amplificação espécie-específico em 108 (63,53 por cento) equinos. Houve diferença altamente significativa (p < 0,0001) entre RIFI e nPCR; RIFI e esfregaço sanguíneo; e nPCR e esfregaço na detecção do parasito. O resultado do presente estudo indica que a infecção por T. equi está amplamente distribuída entre os equinos na microrregião de Jaboticabal, região Nordeste do Estado de São Paulo, Brasil.

Serologic evidence of equine granulocytic anaplasmosis in horses from central West Brazil / Evidência sorológica de anaplasmose granulocítica equina em equinos do Centro-oeste Brasil

Ehrlichiosis is a zoonotic disease caused by gram-negative and intracellular obligatory bacterial organisms. Equine Granulocytic Anaplasmosis - EGA (formerly Equine Granulocytic Ehrlichiosis, EGE) is a seasonal disease, normally self-limited in horses. There are few reports in Brazil about this ehrlichial agent, as well as its natural vectors. Nowadays, veterinarians are considering the suspicion of EGA in horses with suggestive symptoms of ehrlichiosis and which do not respond to piroplasmosis treatment. The aim of the present study was to identify horses exposed to the agent A. phagocytophilum by serological and molecular techniques. Twenty equine blood and serum samples from the central West region of Brazil were evaluated by microscopic examination of buffy coat smear, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), indirect fluorescent antibody test (IFAT) and nested polymerase chain reaction (nPCR). Additionally, the serodiagnosis of Theileria equi by IFA and ELISA were carried out, as well as molecular diagnosis by nPCR. Thirteen (65 percent) serum samples were positive for A. phagocytophilum by ELISA, but none of them were positive by buffy-coat smear examination or nPCR. Antibodies IgG anti-T. equi were detected in 18 (90 percent) and 17 (85 percent) horses by IFA and ELISA, respectively and the agent was detected in 9 (45 percent) animals by nPCR. Our data may be considered as important information to understanding the occurrence of EGA and equine piroplasmosis in central West Brazil.

A Erliquiose é uma doença zoonótica causada por bactérias gram-negativas e intracelulares obrigatórias. A Anaplasmose Granulocítica Equina - AGE (anteriormente denominada Erliquiose Granulocítica Equina, EGE) é uma enfermidade sazonal, normalmente auto-limitante em equinos. No Brasil, existem poucos relatos deste agente erliquial, bem como de seus vetores naturais. Atualmente, veterinários têm levantado a suspeita de casos de AGE em equinos com sinais clínicos sugestivos de erliquiose e não responsivos ao tratamento para a piroplasmose equina. O objetivo do presente estudo foi identificar equinos expostos a A. phagocytophilum por meio de técnicas sorológicas e moleculares. Vinte amostras de sangue e soro de equinos da região Centro-oeste do Brasil foram avaliados por meio do exame microscópico de capa leucocitária, ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e reação em cadeia da polimerase (nested PCR). Adicionalmente, o diagnóstico sorológico de Theileria equi pela RIFI e ELISA foram realizados, assim como o diagnóstico molecular pelo nPCR. Treze (65 por cento) amostras de soro foram positivas para A. phagocytophilum pelo teste de ELISA, entretanto nenhum equino foi positivo pelo exame microscópico da capa leucocitária ou nPCR. Anticorpos IgG anti-T. equi foram detectados em 18 (90 por cento) e 17 (85 por cento) equinos pela RIFI e ELISA, respectivamente e o agente foi detectado em 9 (45 por cento) animais pelo nPCR. Estes dados sugerem importante informação para o entendimento da ocorrência da AGE e piroplasmose equina no Centro-oeste do Brasil.

The influence of the fasting period on the number of nymphal instars and on the sex ratio of Argas (Persicargas) miniatus (Acari: Argasidae) / Influência do período de jejum no número de instares ninfais e na razão sexual de Argas (Persicargas) miniatus (Acari: Argasidae)

The current study investigated the biology of nymphs of the first and second instars of Argas (Persicargas) miniatus. Nymphs were deprived of food for 15, 30 or 60 days and held at 27 ± 1 ºC and 80 ± 10 percent relative humidity (controlled conditions) or at room conditions of temperature and relative humidity. Nymphs of first instar deprived of food for 15 or 30 days molted to second and third instars in both controlled and room conditions. Nymphs of the first instar deprived of food for 60 days had 28 and 37 percent mortality in controlled and room conditions, respectively; and survivors did not attach to the host. Nymphs of the second instar, deprived of food for 60 days, molted either to the third instar or to males after feeding on Gallus gallus, and the nymphs of the third instar developed to adults (42.42 percent males and 36.36 percent females when nymphs were held in controlled temperature and humidity conditions, and 40.54 percent males and 48.65 percent females when nymphs were held in room conditions). The remainder of the nymphs molted to the fourth instar and then molted to females. In conclusion, the nymphal starvation period of 60 days determined the number of nymph instars in the life cycle of A. miniatus under the experimental conditions studied.

Os aspectos biológicos de ninfas de primeiro e segundo instares de Argas (Persicargas) miniatus quando submetidas a diferentes períodos de jejum (15, 30 e 60 dias), foram estudados em estufa climatizada (27 ± 1 ºC e 80 ± 10 por cento de umidade relativa) e em ambiente de laboratório. Ninfas de primeiro instar que foram submetidas a um período de jejum de 15 e 30 dias mudaram para ninfas de segundo e terceiro instar, em ambas as condições estudadas. No período de 60 dias de jejum verificou-se mortalidade de 28 e 37 por cento das ninfas de primeiro instar, em estufa climatizada e em ambiente de laboratório, respectivamente. As ninfas sobreviventes não se fixaram sobre os hospedeiros. As ninfas de segundo instar, após 60 dias de jejum, desenvolveram-se em ninfas de terceiro instar ou machos, quando alimentadas em Gallus gallus. Ainda neste grupo, as ninfas de terceiro instar mudaram para adultos (42,42 e 40,54 por cento machos; 36,36 e 48,65 por cento fêmeas, nas condições ambiente de laboratório e estufa climatizada, respectivamente) e o restante desenvolveu-se em ninfas de quarto instar que por sua vez mudaram para fêmeas. Então, a situação de jejum (60 dias) em que as ninfas foram submetidas determinou o número de ninfas no ciclo biológico de A. miniatus, sob as condições experimentais estudadas.

Sensitivity evaluation of a single-step PCR assay using Ehrlichia canis p28 gene as a target and its application in diagnosis of canine ehrlichiosis / Avaliação da sensibilidade da PCR em uma etapa com base no gene p28 de Ehrlichia canis e sua aplicação no diagnóstico da erliquiose canina

The aim of this study was to optimize a PCR assay that amplifies an 843 pb fragment from the p28 gene of Ehrlichia canis and compare it with two other PCR methods used to amplify portions of the 16S rRNA and dsb genes of Ehrlichia. Blood samples were collected from dogs suspected of having a positive diagnosis for canine ehrlichiosis. Amplification of the p28 gene by PCR produced an 843-bp fragment and this assay could detect DNA from one gene copy among 1 billion cells. All positive samples detected by the p28-based PCR were also positive by the 16S rRNA nested-PCR and also by the dsb-based PCR. Among the p28-based PCR negative samples, 55.3 percent were co-negatives, but 27.6 percent were positive in 16S rRNA and dsb based PCR assays. The p28-based PCR seems to be a useful test for the molecular detection of E. canis, however improvements in this PCR sensitivity are desired, so that it can become an important alternative in the diagnosis of canine ehrlichiosis.

O objetivo deste estudo foi aperfeiçoar um ensaio de PCR que amplificasse um fragmento de 843 pares de bases do gene p28 da Ehrlichia canis e compará-lo com outros dois métodos de PCR utilizados para amplificar partes do gene 16S rRNA e dsb do gênero Ehrlichia. Amostras sanguíneas foram colhidas de cães com diagnóstico clínico de erliquiose. A amplificação do gene p28 pela PCR produziu um fragmento de 843pb e esse ensaio permitiu a detecção do DNA de um parasita dentre 1 bilhão de células. Todas as amostras positivas detectadas pela PCR baseada no gene p28 foram também positivas pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA e também pela PCR dsb. Dentre as amostras negativas para a PCR p28, 55,3 por cento foram co-negativas, mas 27,6 por cento foram positivas pela PCR baseada nos genes 16S rRNA e dsb. A PCR p28 parece ser um teste útil para detecção molecular de E. canis, entretanto otimizações na sensibilidade nesta PCR são necessárias, para que esta técnica se torne uma importante alternativa no diagnóstico da erliquiose canina.

Estudo comparativo de três métodos de diagnóstico para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em eqüinos de áreas endêmicas do estado do Rio de Janeiro / Comparative studies of three methods for detection Theileria equi antibody in endemic areas horses from Rio de Janeiro state

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação de fixação do complemento (RFC) no diagnóstico de Theileria equi em amostras de soro de 79 equinos na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brasil. Houve reação positiva para Theileria equi em 74,7, 75,9 e 60,8% das amostras testadas pela RIFI, ELISA eRFC, respectivamente. Observou-se discrepância em 16,45% (n=13) das amostras de soro testadas pelo ELISA indireto e RIFI. Quando comparado a RIFI e a RFC, a discrepância observada entre os soros testados foi de 36,70% (n=29). O teste ELISA indireto e a RFC apresentaram discordância em 37,97% (n=30) das amostras de soros. Os resultados do presente estudo sugerem que a melhor alternativa para o diagnóstico sorológico de T. equi em eqüinos portadores é aassociação dos testes de RIFI e ELISA indireto, especialmente para a realização de estudos soroepidemiológicos

This study was carried out to evaluate indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and complement fixation test (CFT) of Theileria equi diagnosis in sera samples of 79 horses at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brazil were tested. Positive reaction was obtained in 74.7, 75.9 and 60.8% of samples tested by IFAT, indirect ELISA and CFT, respectively. Discrepancy was observed in 16.45%(n=13) of serum samples tested by ELISA and IFAT. While IFAT and CFT were compared, the discrepancy observed among the samples tested were 36.71% (n=29). Indirect ELISA and CFT test presented disagreement in 37.97% (n=30) of serum samples tested. Results of present study suggests that the best alternative for serological diagnosis T. equi in carriers horses is the combined use of IFAT and indirect ELISA test, especially for accomplishment of seroepidemiological studies.